Im Schloss Johannisburg in Aschaffenburg befindet sich das Schlossmuseum der Stadt Aschaffenburg, das die Kunst- und Kulturgeschichte der Region mit einer umfangreichen Sammlung präsentiert.
Die musealen Räume liegen im zweiten Stock des Schlosses. Seit 2016 wird das Schloss umfangreich restauriert; diese Arbeiten erstrecken sich über mehrere Jahre, weshalb einzelne Ausstellungsräume zeitweise geschlossen und Bestände umgeordnet werden.
Gezeigt werden Kunstwerke und historische Zeugnisse aus sechs Jahrhunderten sowie wechselnde Sonderausstellungen, unter anderem zur zeitgenössischen Kunst. Im alten Bergfried sind Arbeiten des Bildhauers Johannes (Hans) Juncker zu sehen; er schuf u. a. den Altar, die Kanzel und die Figuren des Portals für die Schlosskapelle sowie die Kanzel der Stiftskirche St. Peter und Alexander. Eine Kabinettausstellung vermittelt die Provenienz der Objekte des Schlossmuseums. Im Ostflügel stehen Räume für moderne Kunst zur Verfügung, in denen Skulpturen und Werke gegenwärtiger Aschaffenburger Künstler gezeigt werden.
Im Schloss Johannisburg ist außerdem die Bayerische Staatsgalerie Aschaffenburg als Teil der Bayerischen Staatsgemäldesammlungen untergebracht. Die altdeutsche Galerie widmet sich vor allem Werken von Lucas Cranach dem Älteren und seiner Werkstatt. Hervorzuheben ist eine Sammlung von Architekturmodellen aus Kork, die die bedeutendsten Bauwerke des antiken Rom detailreich abbildet und in ihrem Umfang und Detailreichtum international herausragt.